样品要求
  样品要求
 蛋白质N末端测序样品要求
 1)通则
 样品N端未被封闭。
 样品如被修饰，请详细告知修饰方式。
 样品如有特殊理化性质（如膜蛋白、PVDF转膜不易结合，特殊酶活性，特殊结构等），请详细  说明。
 若为已知序列样品，请告知预期序列信息。
 请务必告知样品表观分子量范围。
 建议客户提供溶液样品或含样品的PVDF膜，微量样品请不要以冻干粉形式提供。特殊情况请致  电上海基康生物技术有限公司咨询。
 2) 溶液
 样品纯度应达到95%以上（HPLC），标明准确纯度。纯度越高，实验结果越理想。
 样品浓度不低于5 pmol/μl（5 uM）, 体积不少于10μl, 并标明准确浓度。
 请务必标明样品缓冲液的成份，并保证样品缓冲液中不含蛋白酶。
 请自留备份，以便交流实验情况。
 若运送路程较长，请将样品置入冰盒内保存，以防止蛋白质降解
 3)PVDF膜
 请务必使用PVDF膜，不能用NC膜（硝酸纤维素膜）替代。
 为防止部分蛋白质可能发生的在电泳过程中被胶内杂质封闭N末端。请自行考虑做预电泳。即用  低电流跑空胶2～2.5小时后再上样进行电泳分离。
 电泳过程中，应尽量避免条带拖尾现象。用于测序的PVDF膜上条带应狭窄清晰。
 尽可能使用厚胶转膜，这样能够保证转膜后单位面积上样品量相对多些。如若转膜后目的条带  不够清晰，请累积三条以上的目的条带用于测序。
 样品转膜后，请使用Coomassie R-250染色1分钟，避免使用Coomassie G-250。脱色液中的  乙醇可增加到40－60％，脱色过程中注意观察。背景颜色很快脱掉后，纯净水里漂洗一下，在滤  纸上晾干。
 含样品的PVDF膜请夹在滤纸间保存在密闭塑料袋中，冰箱内可以放置3～6个月。电转移缓冲液  建议使用CAPS缓冲液，而不要使用Tris—甘氨酸缓冲液。
 4)蛋白混合液——基康代您进行电印迹实验详细要求请查看蛋白质电泳和转膜服务定单。
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